Bộ phim 3 Giờ Sáng xoay quanh ba câu chuyện kinh dị đầy ám ảnh, mỗi câu chuyện tập trung vào những nhân vật chính đầy tính cách và số phận đan xen. Đầu tiên, hai chị em quản lý một cửa hàng tóc giả, nhưng họ không ngờ rằng cửa hàng của mình lại là nơi trú ngụ của những linh hồn bị bỏ quên. Khi một loạt sự kiện kỳ lạ xảy ra, họ phải đối diện với sự thật kinh hoàng về nguồn gốc của cửa hàng.
Tiếp theo, một nhân viên nhà tang lễ bắt đầu có cảm xúc với một linh hồn nữ trẻ tuổi đã qua đời. Tình yêu giữa họ không chỉ gặp khó khăn do ranh giới giữa thế giới thực và thế giới siêu nhiên, mà còn phải đối diện với sức mạnh tăm tối từ quá khứ của linh hồn.
Cuối cùng, hai giám đốc công ty yêu thích chơi khăm và thích trêu ghẹo người khác. Nhưng khi họ quyết định "vui vẻ" với một ngôi nhà bỏ hoang vào lúc 3 giờ sáng, họ không ngờ rằng hành vi của mình đã kích hoạt các hiện tượng siêu nhiên và mang lại cho họ cái kết đắng lòng.
Với không gian thời gian được thiết lập vào lúc 3 giờ sáng - khoảnh khắc ma quái nhất trong suốt buổi đêm, bộ phim mang lại cho khán giả những trải nghiệm kinh dị và căng thẳng khi theo dõi cuộc chiến sinh tồn của các nhân vật trong điều kiện ám ảnh này.